水提取乙醇沉淀法(簡稱醇沉法)是中藥活性成分純化與中藥制劑精制過程中常用的方法。從20世紀(jì)50年代以來，多功能提取濃縮罐醇沉法在中藥制劑生產(chǎn)過程中已得到廣泛應(yīng)用。2010版中國藥典I部所載的成方制劑和單味制劑中，140余種是經(jīng)過醇沉工藝所得。然而，醇沉法正處在中藥關(guān)鍵技術(shù)去與留的十字路口。一方面，醇沉能夠純化提取液，減少中藥的服用劑量和具有良好的成型性，被視為中藥制劑提取精制的“通則”；另一方面，醇沉卻造成了中藥有效成分的流失，影響了中藥制劑的有效性和安全性，并且存在工藝參數(shù)難以控制、醇沉過程時間長、能源材料費(fèi)用大等問題。
影響醇沉效果的因素很多，水提液濃縮溫度、相對濃度，醇沉液含醇量、乙醇添加方法，醇沉次數(shù)、醇沉溫度與時間等都會對醇沉物的品質(zhì)產(chǎn)生影響。而在應(yīng)用過程中，往往不重視醇沉的對象與效果，而套用現(xiàn)成的醇沉工藝進(jìn)行分離純化，采用指標(biāo)性成分得失為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評價，使醇沉技術(shù)受到眾多垢病，而且，絮凝澄清技術(shù)、超濾技術(shù)、大孔樹脂吸附技術(shù)的興起，大有取代傳統(tǒng)醇沉技術(shù)的趨勢。因此，審視中藥醇沉技術(shù)的應(yīng)用范圍，對醇沉效果做出客觀合理的評價，對于發(fā)揮醇沉技術(shù)優(yōu)勢、發(fā)展中藥提取純化技術(shù)、發(fā)揚(yáng)中醫(yī)藥特色具有十分重要的意義。
1、生物堿類成分
生物堿在中藥化學(xué)成分中極其重要，常用的400多味植物中藥中至少有40余味含有生物堿。生物堿大部分水溶性差，能溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑。苦參堿具有抗炎、免疫抑制等作用，張保獻(xiàn)等比較了不同精制方法對苦參水提取液中苦參總生物堿含量的影響，發(fā)現(xiàn)醇沉法精制，醇沉濃度70%，冷藏放置24h，苦參堿含量達(dá)到12.63mg/g，是其它方法的2~5倍。烏頭堿及其復(fù)方制劑具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛的功效，張風(fēng)雷等以烏頭總生物堿含量與總生物堿收率為考察指標(biāo)，通過正交設(shè)計(jì)研究了附子水提醇沉工藝，確定醇沉工藝為水提取液濃縮至相對濃度0.75g/mL，醇沉濃度80%，調(diào)節(jié)pH至5，總生物堿含量可達(dá)6.48mg/g，收率2.70%。小檗堿具有抗炎、鎮(zhèn)痛、降血壓、降血糖等作用，林慧彬等以小檗堿和總生物堿的含量為考察指標(biāo)，研究了采用醇沉技術(shù)精制黃連解毒湯的方法，確定濃縮液相對濃度0.24g/mL，醇沉濃度40%，靜置冷藏24h，小檗堿和總生物堿的含量分別達(dá)到10.59mg/g，173.90mg/g。
2、黃酮類成分
黃酮類化合物在植物界分布廣泛，常以游離態(tài)或與糖結(jié)合成普形式存在，一般能溶于水或稀乙醇、甲醇等有機(jī)溶劑，具有很強(qiáng)的生理活性，具有降低血脂、保肝、抗炎、抗菌、擴(kuò)冠等多重作用。腫節(jié)風(fēng)中所含總黃酮具有抗腫瘤活性，任榮軍等采用均勻設(shè)計(jì)的方法，以草珊瑚總黃酮為考察指標(biāo)，優(yōu)選了腫節(jié)風(fēng)的醇沉工藝，結(jié)果為水提液濃縮濃度為0.6g/mL，醇沉濃度50%，總黃酮保留率約96.5%。銀杏總黃酮能抑制內(nèi)皮素的活性，寧康健等[7j研究了銀杏葉水煎醇沉液對兔血壓的影響，醇沉條件為銀杏葉水提液濃縮至相對濃度1.0g/mL，醇沉濃度60%，耳緣靜脈注射能使麻醉兔收縮壓、舒張壓降低，對動脈血壓影響較大。陳建真等研究了葛根降糖膠囊水提醇沉的工藝條件，確定醇沉條件水提取液濃縮至相對濃度1.20g/mL，醇沉濃度55%，靜置24h，浸膏中葛根素轉(zhuǎn)移率67.1%、含量24.36mg/mL。
3、蕙醌類成分
蕙醌類化合物在中藥中，尤其是在寥科、寥亞科植物中廣泛存在，游離態(tài)大多具有結(jié)晶型，不溶或難溶于水，成普后易溶入熱水、乙醇、甲醇中，各種蕙醌及其普類具有明顯的止瀉與抗菌作用。孫玉琦等叫分別采用一次醇沉、多次醇沉、分次醇沉、分級醇沉等5種方法，制備了大黃水提液80%濃度的醇沉產(chǎn)物，并對醇沉物中游離蕙醌、結(jié)合蕙醌的含量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)多次醇沉提取游離蕙醌最多，分次醇沉提的結(jié)合蕙醌最多。茜草含有茜草素、大黃素甲醚等蕙醌類成分，寧康健等叫研究了生茜草和茜草炭醇沉產(chǎn)物對小鼠凝血作用的影響。多功能濃縮提取設(shè)備醇沉工藝為水提液濃縮至相對濃度1g/mL，醇沉濃度60%，靜置12h，結(jié)果發(fā)現(xiàn)茜草水提醇沉液能夠明顯縮短小鼠的凝血時間。涂興明等考察了復(fù)方大黃噴霧液中大黃素在醇沉工藝中的含量變化情況，分別采用醇沉濃度60%，70%，80%，發(fā)現(xiàn)醇沉產(chǎn)物中大黃素含量呈遞增趨勢，而總量基本無變化。
4、有機(jī)酸類成分
有機(jī)酸廣泛存在于植物體的各部位，果實(shí)中多見，一般有酸味，具收斂、固澀、抗菌等作用。有機(jī)酸多溶于水、乙醇、甲醇，難溶于弱極性有機(jī)溶劑。甘草流浸膏是甘草浸膏水溶化后經(jīng)二次醇沉，分次靜置過夜所得，醇沉濃度65%，濃氨試液調(diào)pH值，甘草酸的含量1.8%以上[pzl。楊海燕等研究了采用醇沉技術(shù)純化金銀花中綠原酸的工藝，發(fā)現(xiàn)醇沉可有效去除金銀花粗粉中的雜質(zhì)，最佳醇沉濃度60%，綠原酸收率達(dá)90.16%。板藍(lán)根是清熱解毒的常用中藥，療效確切，含有苯甲酸、水楊酸等有機(jī)酸類成分。板藍(lán)根注射液、板藍(lán)根沖劑以及大多含板藍(lán)根的中成藥制劑均采用水提醇沉法提取富集有效成分。板藍(lán)根顆粒是板藍(lán)根藥材水提后濃縮至相對濃度1.20g/mL，醇沉濃度60%，加入輔料，制粒，干燥而得。制備過程中指標(biāo)性成分靛玉紅、靛藍(lán)等大量流失，而有機(jī)酸類成分大多保留。咽舒飲泡騰片由金銀花、麥冬、玄參、薄荷、甘草等醇沉產(chǎn)物加入檸檬酸、NaHCO3等輔料制備而成，肖衛(wèi)紅等以綠原酸含量為考察指標(biāo)，采用單因素考察的方法，優(yōu)選了金銀花等藥材醇沉工藝，確定最佳工藝為中藥水提濃縮液加乙醇至濃度40%，醇沉?xí)r間24h，綠原酸轉(zhuǎn)化率為79.4%。
5、多糖類成分
多糖類成分廣泛存在于動物、植物、微生物中，到目前為止，已有300多種多糖類化合物從天然產(chǎn)物中分離出來，研究表明多糖除了有增強(qiáng)免疫功能、抗腫瘤作用、抗氧化、抗衰老、消化系統(tǒng)保護(hù)作用等生物學(xué)效應(yīng)外，還有抗菌、抗病毒、降血糖、降血脂、抗輻射、抗凝血等作用。采用醇沉法從沉淀物中回收多糖是一種簡單而常用方法。鄭亞軍采用正交試驗(yàn)，優(yōu)化從椰子花序汁液中純化椰花汁多糖的醇沉工藝參數(shù)，結(jié)果為粗多糖液濃縮度0.8，加入4倍量85%乙醇，多糖提取率98.00%、含量91.44%。林德祥等以云芝多糖含量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選多孔菌科菌類云芝中云芝多糖的醇沉工藝，確定醇沉條件為水提液濃縮至相對濃度1.25g/mL，加4倍95%乙醇，醇沉溫度25℃，靜置時間24h，云芝多糖含量達(dá)35%。陳彥等以多糖含量為指標(biāo)，對注射用紅參多糖的提取純化工藝進(jìn)行研究，確定醇沉條件為藥液相對濃度1.0g/mL，醇沉濃度80%，40℃靜置過夜，多糖含量76%以上，粗多糖得率12%左右。
6、其它類成分
不銹鋼濃縮提取設(shè)備醇沉法還常用于其它天然化合物如皂普、木脂素、可溶性纖維等成分的純化。徐新以柴胡皂普。的含量為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選柴胡的醇沉工藝，藥液濃縮至相對密度為1.15，加1.5倍量95%乙醇，28℃靜置時間24h，可使柴胡皂普。含量達(dá)0.30%。姜怡等以五味子醇甲為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選分析五味子水提醇沉的提取純化工藝，五味子醇甲為木脂素類，是五味子中主要活性成分，優(yōu)選條件為水提液濃縮至相對濃度1.0g/mL，醇沉濃度80%，靜置時間12h，五味子醇甲含量可達(dá)4.56%。任平國等采用NaCO3溶液提取，濾液醇沉的方法從豆渣中提取可溶性膳食纖維(SDF)，提取條件為NaCO3調(diào)節(jié)pH至12.4倍體積乙醇醇沉，豆渣中SDF提取率達(dá)44.3%。
綜上可知，大多數(shù)的中藥成分都可采用醇沉技術(shù)進(jìn)行純化。醇沉濃度一般在60%~80%之間，所需醇沉濃度由大到小的順序?yàn)槎嗵穷悺⑸飰A類、蕙醌類、有機(jī)酸類、黃酮類，與絮凝澄清等新技術(shù)相比，具有工藝成熟、過程明確、應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn)。然而，通過分析發(fā)現(xiàn)，在醇沉技術(shù)實(shí)際應(yīng)用過程中，有的中藥所含化學(xué)成分的水溶性較差，這類中藥是否適合水提醇沉的方法？60%~80%是最常用的醇沉濃度，是否能夠最大限度保留有效成分除去雜質(zhì)成分？中藥所含化學(xué)成分千差萬別，是否可以采用類似的醇沉方式？這就要求對醇沉產(chǎn)物的物理性狀、化學(xué)品質(zhì)以及生物活性等方面進(jìn)行研究，對中藥醇沉技術(shù)做出綜合的評價。
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