戴文工程設(shè)計(jì)(上海)有限公司,1988年成立于中國(guó)上海,公司擁有建筑工程設(shè)計(jì)綜合甲級(jí)資質(zhì)、機(jī)電施工三級(jí)資質(zhì)、建筑裝飾裝修施工二級(jí)資質(zhì)、環(huán)保工程三級(jí)資質(zhì)、空氣凈化工程二級(jí)資質(zhì)、電子與智能化工程二級(jí)資質(zhì),嚴(yán)格遵循IS09001國(guó)際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系進(jìn)行內(nèi)部管理,順利通過(guò)了50430工程項(xiàng)目施工質(zhì)量管理體系,28001職業(yè)健康安全管理體系認(rèn)證、24001環(huán)境管理體系認(rèn)證,樹立了良好的企業(yè)形象。戴文凈化工程事業(yè)部為戴文國(guó)際旗下一專業(yè)分支機(jī)構(gòu),專業(yè)從事于免疫細(xì)胞培養(yǎng)、干細(xì)胞庫(kù)存實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)施工項(xiàng)目。
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1、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及設(shè)備
(一)環(huán)境要求
組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與其他一般實(shí)驗(yàn)室工作的主要區(qū)別在于要求保持無(wú)菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。要求工作環(huán)境清潔,空氣清新,干燥和無(wú)煙塵。
(二)面積與預(yù)算
實(shí)驗(yàn)室總面積96m3左右,大約耗資40萬(wàn)(不含特殊先進(jìn)設(shè)備)。
(三)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的布局
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室布局大致為:無(wú)菌操作區(qū)、孵育區(qū)、制備區(qū)、清洗區(qū)、消毒滅菌處理區(qū)、儲(chǔ)藏區(qū)。
1.無(wú)菌操作區(qū)
(1)無(wú)菌操作室:無(wú)菌操作區(qū)只限于細(xì)胞培養(yǎng)及其他無(wú)菌操作的區(qū)域,最好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。
無(wú)菌操作間的空氣消毒:紫外線燈,空氣過(guò)濾的恒溫恒濕裝置。
(2)超凈工作臺(tái):操作簡(jiǎn)單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。
超凈工作臺(tái)工作原理(大致相同)—-通常是將室內(nèi)空氣經(jīng)粗過(guò)濾器初濾,由離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)高效空氣過(guò)濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)無(wú)菌區(qū),從而形成無(wú)塵無(wú)菌的高潔凈度工作環(huán)境。
2.孵育區(qū)
本區(qū)對(duì)無(wú)菌的要求雖不比無(wú)菌區(qū)嚴(yán)格,但仍需清潔無(wú)塵,因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來(lái)往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行,后者費(fèi)用高,一般實(shí)驗(yàn)室多采用孵箱進(jìn)行工作。
3.制備區(qū)
在該區(qū)主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。
4.儲(chǔ)藏區(qū)
主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無(wú)菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等,此環(huán)境也需要清潔無(wú)塵。
5.清洗和消毒滅菌區(qū)
清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開,主要進(jìn)行所有細(xì)胞培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制備等工作。
(四)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備
1. 常用的基本設(shè)備
(1) 儀器:
a)顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細(xì)胞培養(yǎng)室所必需的日常工作常規(guī)使用設(shè)備之一,便于掌握細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并觀察有無(wú)污染等。
b) 培養(yǎng)箱:體外培養(yǎng)的細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,大多數(shù)情況下,最適溫度是37℃,溫差變化一般不應(yīng)超過(guò)±0.5℃。
恒溫培養(yǎng)箱——應(yīng)選隔水式或晶體管自控溫培養(yǎng)箱,此類培養(yǎng)箱靈敏度高,溫度控制較穩(wěn)定。一般的恒溫培養(yǎng)箱價(jià)格較便宜。
CO2培養(yǎng)箱——目前多數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)室已廣泛使用。CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點(diǎn)是能夠提供進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易于使培養(yǎng)液的pH保持穩(wěn)定,適用于開放或半開放培養(yǎng)。
c)干燥箱:用于細(xì)胞培養(yǎng)箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等須干熱消毒。干熱消毒時(shí),電熱干燥箱升溫較高,一般需達(dá)到160℃以上。通常使用鼓風(fēng)式電熱干燥箱。
d)水純化裝置:細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)水的質(zhì)量要求較高,細(xì)胞培養(yǎng)以及與細(xì)胞培養(yǎng)工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴(yán)格純化處理。水純化時(shí)可采用離子交換裝置或蒸餾器。
e)冰箱:細(xì)胞培養(yǎng)室必須配備
○a普通冰箱或冷藏柜
——儲(chǔ)存培養(yǎng)液、生理鹽水、Hank’s液試劑等培養(yǎng)用的物品及短期保存組織標(biāo)本。
○b低溫冰箱(-20℃)、超低溫冰箱
——用于儲(chǔ)存需要冷凍保存生物活性及較長(zhǎng)時(shí)期存放的制劑,如酶、血清等。
——細(xì)胞培養(yǎng)室的冰箱應(yīng)屬專用,不得存放易揮發(fā)、易燃燒等對(duì)細(xì)胞有害的物質(zhì),且應(yīng)保持清潔。
f)細(xì)胞冷凍儲(chǔ)存器:儲(chǔ)存器常用的是液氮容器。根據(jù)使用需要分為不同的類型及多種規(guī)格。選擇購(gòu)置液氮容器時(shí)要綜合考慮容積大小,取放使用方便及液氮揮發(fā)量(經(jīng)濟(jì))三種因素。
g)離心機(jī):進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),常規(guī)需要進(jìn)行制備細(xì)胞懸液、調(diào)整細(xì)胞密度、洗滌、收集細(xì)胞等工作,通常需要使用離心機(jī)。
h)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
i)消毒器:直接或間接與細(xì)胞接觸的物品均需消毒滅菌處理。
常用:高壓蒸汽滅菌鍋,手提式高壓蒸汽消毒器
j)濾器:常使用的濾器有Zeiss濾器、玻璃濾器和微孔濾器
(2)培養(yǎng)用器皿:
培養(yǎng)瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培養(yǎng)、繁殖細(xì)胞。進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)瓶瓶口加蓋螺旋瓶蓋或膠塞,膠塞多用于密封培養(yǎng)。
培養(yǎng)皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分離、處理組織或做細(xì)胞毒性、集落形成、單細(xì)胞分離、同位素?fù)饺?、?xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)使用。
多孔培養(yǎng)板:為塑料制品??晒┘?xì)胞克隆及細(xì)胞毒性等各種檢測(cè)實(shí)驗(yàn)使用。其優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約樣本及試劑,可同時(shí)測(cè)試大量樣本,易于進(jìn)行無(wú)菌操作。
c)其他用品:尚有收集細(xì)胞用的離心管,放置試劑或臨時(shí)插置吸管用的試管,裝放吸管以便消毒的玻璃或不銹鋼容器,用于存放小件培養(yǎng)物品便于高壓消毒的鋁制飯盒或貯槽,套于吸管頂部的橡膠吸頭,封閉各種瓶、管的膠塞、蓋子、凍存細(xì)胞用的安瓿或凍存管、不同規(guī)格的注射器、燒杯和量筒以及漏斗,超凈工作臺(tái)使用的酒精燈,供實(shí)驗(yàn)人員操作前清潔消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型噴壺等。
(3)器械:主要用于解剖、取材、剪切組織及操作時(shí)持取物件。常用的有:手術(shù)刀或解剖刀、手術(shù)剪或解剖剪(彎剪及直剪),用于解剖動(dòng)物、分離及切剪組織,制備原代培養(yǎng)的材料;眼科虹膜小剪(彎剪或直剪),用于將組織材料剪成小塊;血管鉗及組織鑷、眼科鑷(彎、直),用于持取無(wú)菌物品(如小蓋玻片)夾持組織等;口腔科探針或代用品,用以放置原代培養(yǎng)之組織小塊。