貨號：70022 mRNA純化試劑盒 (12)
英文名稱：Oligotex mRNA Mini Kit (12)
中文名稱：mRNA純化試劑盒 (12)
品 牌：Qiagen
貨 號：70022
從總RNA中純化mRNA以及回收體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物
只需30分鐘即可獲得高產(chǎn)量純MRNA
無需使用Oligo-DT纖維素或乙醇沉淀
靈活性強，適合不同起始量的RNA樣品
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Oligotex mRNA Kits可從總RNA中純化mRNA，回收poly A+體外轉(zhuǎn)錄子。每個Oligotex Kit包括用于結(jié)合poly A+ mRNA的Oligotex樹脂和用于洗滌、洗脫結(jié)合的mRNA的離心柱。Oligotex Direct mRNA Kits可從細(xì)胞和組織中純化mRNA。
特點
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參數(shù)
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應(yīng)用
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PCR, real-time PCR, microarray, transfection..
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洗脫體積
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20–100 μl
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規(guī)格
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Spin column
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主要樣本類型
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Total RNA
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處理
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Manual (centrifugation)
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純化總RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白
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Poly A+ mRNA
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樣本量
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<250 μg
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穩(wěn)定
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Yes
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技術(shù)
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Polystyrene-latex particles
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每次運行或制備時間
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33–50 minutes
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產(chǎn)量
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>90% recovery
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性能
Oligotex mRNA kits適用于從少于0.25 mg到1 mg總RNA起始材料中分離mRNA（見表）。
使用Oligotex樹脂純化的Poly A+ mRNA適用于RT-PCR（參見RT-PCR of beta-actin mRNA），使用Oligotex樹脂從總RNA中純化的poly A+ mRNA已被用于Northern 印記、點印記或狹縫印記（參見Isolation of mRNA from total RNA）。
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表. Oligotex mRNA kits的規(guī)格每次實驗起始材料量（總RNA）
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每個Oligotex mRNA Mini Kit*最多制備次數(shù)
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每個Oligotex mRNA Midi Kit*最多制備次數(shù)
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≤0.25 mg
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12 (13)?
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12 (28)?
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0.25—0.5 mg
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6
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12 (14)?
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0.5—0.75 mg
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4
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12 (14)?
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0.75—1 mg
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3
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12
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* 使用離心管操作流程。批量實驗流程可選。
? 購買額外的離心柱后，每個試劑盒的最多制備次數(shù)。可能需要額外的1.5 ml微離心管。
原理
Oligotex mRNA Kits含有離心柱和各種必需的試劑，用于從總RNA樣品中純化poly A+ mRNA或回收體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。Oligotex樹脂由大小均一（直徑1.1 μm ）的聚苯乙烯-橡膠顆粒組成，為完美的球狀（參見Oligotex particles and oligo-dT cellulose），含有與表面共價結(jié)合的dC10T30寡核苷酸。Oligotex顆粒的大小、成分和表面結(jié)構(gòu)經(jīng)優(yōu)化，均勻分散并需要最少的離心時間。顆粒形成穩(wěn)定的懸浮液，為快速和高效結(jié)合多聚腺苷酸提供較大的表面積。
高效率、高精確度的雜交確保通過快速、高效的雜交獲得高純度的poly A+ mRNA。mRNA回收率通常都高于90%。Oligotex純化過程將poly A+ RNA流失降至最低，避免RNase降解風(fēng)險，手動操作時間最少化。這些都使得該產(chǎn)品是同步處理多個樣品的理想選擇。Poly A+ mRNA適用于各種標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用，也適用于敏感應(yīng)用，如表達分析、差異顯示、cDNA文庫構(gòu)建、顯微注射和SAGE技術(shù)。Oligotex Suspension也可單獨購買。
操作流程
經(jīng)優(yōu)化的Oligotex純化流程方便簡單（參見Oligotex mRNA procedure），將總RNA與Oligotex樹脂共同孵育，簡單離心收集Oligotex:mRNA復(fù)合物。試劑盒中提供的離心柱提供最方便的操作，同時為某些應(yīng)用提供可選的批量操作流程。洗滌之后，用小體積量的Tris緩沖夜或水洗脫mRNA。無需乙醇沉淀。
應(yīng)用
使用Oligotex樹脂純化的Poly A+ mRNA適用于多種下游應(yīng)用，包括：
RT-PCR
CDNA合成
CDNA庫的構(gòu)建
消減雜交
體外翻譯